Citogenetinis paveldimos tyrimo metodas

Citogenetika yra nepriklausoma paveldimumo doktrinos dalis, kurioje nagrinėjami įvairūs, pirmiausia stebimi (išaiškinti) nešėjai, kuriuose yra informacijos apie genetinę paveldimą. Tokie vežėjai yra įvairių tipų chromosomos (polytene, mitozė ir meiotikais), plastidai, tarpfaziniai branduoliai ir, mažiausiai, mitochondrijos.

Atsižvelgiant į tai, citogenetinis metodas yra metodų ir technologijų rinkinys, visų pirma, chromosomų tyrinėjimui, kurio metu nustatomas jų kiekybinis parametras, jų cheminis ir biologinis aprašymas, struktūros ir elgsenos režimai ląstelių dalijimosi metu. Šio tyrimo mokslinis uždavinys yra nustatyti ryšį tarp chromosomų struktūros pokyčių pobūdžio ir dinamikos bei vaizdą, atspindintį simbolių kintamumą.

Viena iš svarbiausių tyrimų sričių, kuri apima citogenetinį metodą, yra žmogaus kariotipo analizė. Paprastai šis tyrimas atliekamas kultūrose, kuriose vyksta seksualinių ir somatinių ląstelių pasidalijimas .

Dažniausiai šiam tyrimui būdinga periferinių kraujo ląstelių, tokių kaip limfocitai, fibroblastai ir kaulų čiulpų ląstelės. Labiausiai prieinama kultūra, naudojama medicinos citogenetikoje, yra kraujo limfocitai. Tai yra tai, kad paprastai jie yra analizuojami po gimdymo. Analizuojant vaisiaus kariotipą, citogenetinis metodas apima ląstelių kultūrų naudojimą, kurio pasirinkimas priklauso nuo daugelio faktorių. Pagrindinis yra nėštumo laikotarpis. Pavyzdžiui, jei šis laikotarpis yra mažesnis nei 12 savaičių, chromogeninių citogenetinės analizės rezultatai geresni, dalyvaujant chorioninėms ląstelėms, o nėštumo laikotarpiais, kurie yra daugiau nei 12 savaičių, tikslinga tyrinėti vaisiaus ląsteles. Šiuo tikslu jie yra išskirti iš placentos ir vaisiaus kraujo.

Norint nustatyti kariotipą, citogenetinis paveldimumo tyrimo metodas reikalauja kraujo mėginio gavimo ne mažiau kaip 1-2 ml. Šiuo atveju pats metodas apima tyrimą, kurį sudaro trys pagrindiniai etapai:

- ląstelių izoliacija ir auginimas, kurioms bus atliekama analizė;

- preparato spalva;

- nuodugniai ištirti vaistą mikroskopu.

Citogenetinis genetikos metodas gali būti efektyvus tik tada, kai tenkinamos šios sąlygos. Pirma, metafazės etape turi būti tam tikras ląstelių skaičius. Antra, auginimas turėtų būti vykdomas griežtai laikantis nustatytų taisyklių ir ne trumpiau kaip 72 valandas. Trečia, ląstelių fiksavimas turėtų būti atliekamas acto rūgšties ir metanolio tirpalu griežtai šių medžiagų santykiu 3: 1.

Spalvų paruošimo citogenetinio tyrimo etape spalvų pasirinkimas atliekamas atsižvelgiant į tyrimo tikslą, tai yra, kokio pobūdžio rekonstrukcijos reikia ištirti. Dažniausiai naudojamas nuolatinio dažymo metodas, nes yra daugiausia paprasta nustatyti kiekybinį chromosomų parametrą. Šiuolaikiniai tyrimai dažniausiai taiko šį dažymo metodą, norėdami nustatyti kiekybinės išraiškos kariotipų anomalijas. Tačiau šis citogenetinis metodas neleidžia nustatyti ir atskleisti chromosomų struktūros dinamikos. Todėl naudojami kiti, specialūs metodai, kurie leidžia išlyginti tolesnio dažymo metodo trūkumą. Labiausiai paplitusios iš jų, pavyzdžiui, diferencijuotos spalvos metodas, G metodas, R metodas ir kt.

Ir, galiausiai, trečiasis tyrimo etapas - mikroskopinis atspalvių chromosomų, kurios yra metafazinėse stadijose, tyrimas. Tokiu būdu nustatomas įprastų ir nenormalių žmogaus vaisiaus organizmo ląstelių skaičius. Paprastai analizuojama keletas audinių.